注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
?
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1（TIMP-1）elisa試劑盒Anti-Arsb Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 免疫學(xué) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

人活化凝血因子Ⅻ（FⅫa）elisa試劑盒Anti-ASIC2 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 發(fā)育生物學(xué) 干細胞 結(jié)合蛋白 表觀遺傳學(xué)

人黑色素瘤標(biāo)記物（MART/Melan-A）elisa試劑盒Anti-ASIC2 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 發(fā)育生物學(xué) 干細胞 細胞凋亡 細胞粘附分子

人核基質(zhì)蛋白22（NMP-22）elisa試劑盒Anti-ASIC1 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 發(fā)育生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細胞 表觀遺傳學(xué)

人含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶1（Tie-1）elisa試劑盒Anti-ASAH1 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 發(fā)育生物學(xué) 干細胞 細胞凋亡 生長因子和激素 新陳代謝

人骨成型蛋白受體Ⅱ（BMPR-Ⅱ）elisa試劑盒Anti-ASIC2 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細胞

人孤腓肽（OFQ/N）elisa試劑盒Anti-ASIC3 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細胞 跨膜蛋白

人肝素結(jié)合EGF樣生長因子（HBEGF）elisa試劑盒Anti-ASL Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細胞

人甘露糖受體（MR）elisa試劑盒Anti-ASS1 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 染色質(zhì)和核信號 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細胞 表觀遺傳學(xué)

人甘氨酸elisa試劑盒Anti-ASPH Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細胞 激酶和磷酸酶

人干擾素誘導(dǎo)T細胞趨化因子（ITAC/CXCL11）elisa試劑盒Anti-ASXL1 Antibody研究領(lǐng)域 干細胞 生長因子和激素 激酶和磷酸酶 細胞表面分子

人非小細胞肺癌相關(guān)抗原211（CA211）elisa試劑盒Anti-ASXL1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細胞凋亡 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶

人兒茶酚胺（CA）elisa試劑盒Anti-ATF1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細胞粘附分子

人多效生長因子（PTN）elisa試劑盒Anti-ATF2 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 細胞周期蛋白 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 線粒體

人對稱二甲基精氨酸（SMDA）elisa試劑盒Anti-ATF1 Antibody(原貨號PB0098)研究領(lǐng)域 免疫學(xué) 轉(zhuǎn)運蛋白 交換蛋白

無機鹽瓊脂培養(yǎng)基250g紡織品防霉性能測試

MUGal(4-甲基傘形酮-β-半乳糖苷)肉湯基礎(chǔ) 100(g) incubation media MUGal(4-甲基傘形酮-β-半乳糖苷)肉湯基礎(chǔ) 100(g)

大腸桿菌&大腸菌群顯色培養(yǎng)基 E.Coli&Coliform Chromogenic Medium 1升 同時檢測大腸菌群和大腸桿菌，培養(yǎng)24小時，大腸桿菌顯紫色，大腸菌群顯紅色

改良MC培養(yǎng)基250incubationmedia改良MC培養(yǎng)基250

氯營養(yǎng)瓊脂 250g 霍亂弧菌傳代培養(yǎng)或純化培養(yǎng)

YM肉湯  YM Broth  250克  BR

土霉素葡萄糖酵母粉瓊脂基礎(chǔ)  OGY Agar  250克  霉菌、酵母菌分離培養(yǎng)和計數(shù)

華倫斯坦實驗室營養(yǎng)瓊脂  WL Nutrient Agar  250克  啤酒和發(fā)酵產(chǎn)品中酵母菌和細菌的計數(shù)

沙氏腦心浸液瓊脂  Sabouraud BHI Agar  250克  真菌檢測
溫和氣單胞菌PCR檢測試劑盒規(guī)格HER2受體抗體4-Hydroxy-2,6,6-trimethyl-1-cyclohexenecarboxylic acid中文名：別名：分子式：C10H16O3

結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白抗體Foliamenthoic acid中文名：別名：8-Hydroxy-2,6-dimethyl-2,6-octadieic acid分子式：C10H16O3

高遷移率族蛋白B4抗體Bombiprene中文名：別名：分子式：C43H70O

組蛋白去乙?；?/font>2抗體環(huán)烯醚萜

乙肝病毒Large S蛋白抗體10-Hydroxyligstroside中文名：別名：分子式：C25H32O13
檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。