注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
人別孕烯醇酮/3α,5α-四氫孕酮（AP/3α,5α-THP）elisa試劑盒Anti-CALCA Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 通道蛋白 鋅指蛋白

人白血病抑制因子受體（LIFR）elisa試劑盒Anti-CALCA Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 通道蛋白

人白介素8（IL-8/CXCL8）自身抗體elisa試劑盒Anti-CALD1 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 干細(xì)胞

人白介素3（IL-3）elisa試劑盒Anti-CALB2 Antibody(原貨號(hào)PB0234)研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué)

人白介素1β轉(zhuǎn)換酶（ICE）elisa試劑盒Anti-CAMK2A Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 通道蛋白

人白介素18（IL-18）elisa試劑盒Anti-CAMK2A Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué)

人癌抗原27-29（CA 27-29）elisa試劑盒Anti-CALR Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 通道蛋白 細(xì)胞膜受體 G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號(hào)

人α酮戊二酸脫氫酶（α-KGDHC）elisa試劑盒Anti-CAMKK1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞分化 淋巴細(xì)胞 新陳代謝

人α半乳糖基（α-Gal）elisa試劑盒Anti-CAMKK2 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

人vav3鳥嘌呤核苷酸交換因子（VAV3）elisa試劑盒Anti-CAP1 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞周期蛋白 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 表觀遺傳學(xué)

人T細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞白血病相關(guān)抗原（TALLA-1/CD231）elisa試劑盒Anti-CAPN1 Antibody(原貨號(hào)PB0282)研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 細(xì)胞周期蛋白 表觀遺傳學(xué)

人TAR DNA結(jié)合蛋白43（TARDBP/TDP43）elisa試劑盒Anti-CAPN2 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶

人Q熱科克斯體1（Q fever）抗體（IgA）elisa試劑盒Anti-CAPN2 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶

人p物質(zhì)（SP）elisa試劑盒Anti-CAPN1 Antibody研究領(lǐng)域 心血管 神經(jīng)生物學(xué) 細(xì)胞膜受體

人PL7抗體/抗蘇氨酰tRNA合成酶（PL7）elisa試劑盒Anti-CARD4/ Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 表觀遺傳學(xué)

Letheen瓊脂250g化妝品中微生物檢測(cè)

MR-VP培養(yǎng)基 250(g) incubation media MR-VP培養(yǎng)基 250(g)

T1N1瓊脂 T1N1 Agar 250克 霍亂弧菌的培養(yǎng)

SCCRAM肉湯250濾膜法食品中沙門氏菌前增菌(SN/TcubationmediaSCCRAM肉湯250濾膜法食品中沙門氏菌前增菌(SN/T1)

M-Broth

LB Lennox瓊脂  LB Lennox Agar  250克  BR

匹克氏肉湯基礎(chǔ)A  Pick，s Broth Base A  250克  溶血性鏈球菌的增菌培養(yǎng)

匹克氏肉湯基礎(chǔ)B  Pick，s Broth Base B  250克  一次性使用衛(wèi)生用品中溶血性鏈球菌的檢驗(yàn)

改良番茄汁瓊脂  Tomato Juice Agar Modified  250克  食品中乳酸菌總數(shù)測(cè)定
交鏈孢霉屬通用PCR檢測(cè)試劑盒廠家G蛋白偶聯(lián)受體110抗體Lamivudine中文名：拉米夫定別名：分子式：C8H11N3O3S

G蛋白偶聯(lián)受體12抗體Stavudine中文名：司他夫定別名：分子式：C10H12N2O4

腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)志物/G蛋白偶聯(lián)受體124抗體Albendazole中文名：阿苯達(dá)唑別名：分子式：C12H15N3O2S

G蛋白偶聯(lián)受體58抗體Fmoc-O-(benzylphospho)-L-threonine中文名：Fmoc-蘇氨酸磷酸芐酯別名：分子式：C26H268P

鳥苷酸環(huán)化酶α1/GCS-α-1抗體8-Phenyloctal中文名：8-苯基辛醇別名：分子式：C14H22O
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。