組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
Taq plus DNA Polymerase磷酸二鯨蠟酯 98%羥基酪  98%

 Pfu DNA Polymerase順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸 分析標準品常春藤皂苷元 分析標準品，≥98%

SP6 RNA Polymerase二溴磷 分析標準品羥基紅花黃色素A  分析標準品，≥98%

T3 RNA Polymerase薯蕷皂素 分析標準品，>95%素 分析標準品，≥98%

T7 RNA Polymerase二甲氧烷 分析標準品，≥99.8% (GC)鹽酸石蒜堿 96%(HPLC)

T4 DNA Polymerase烯酸 N,N-二乙基氨基乙酯 95%鹽酸石蒜堿 分析標準品，≥98%

T7 DNA Polymerase1,3-二羥基酮,二聚體 97%羽扇豆 分析標準品，≥98%

T4 RNA Ligase2,2-二羥基偶氮苯 97%羅漢果苷V  分析標準品，≥98%

T4 DNA Ligase二十二碳六烯酸甲酯 98%羅漢果苷V  98%

TDT二十二碳六烯酸甲酯 分析標準品,98%橄欖苦苷  分析標準品，≥98%(HPLC)

RAPD Primer鄰苯二甲酸二丁酯 分析標準品安石榴苷  98%

Random primers2,4-二氯苯氧乙酸 分析標準品紫丁香苷 分析標準品，≥98%

β-Dextranase2,4-二氯苯氧乙酸 用于植物細胞培養(yǎng), ≥98%（GC)野黃芩苷 分析標準品

5′-NT3,3'-二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽，合 98%花旗松素 分析標準品，≥98%

X-GlcA2,6-二硝基酚 96%蔓荊子黃素 分析標準品，≥98%(HPLC)

BCIG二戊胺 99%二苯胍 97%

他克莫司NF-M (Neurofilament triplet M)  中分子量神經(jīng)絲蛋白（抗原）SMARCD3  肌動蛋白依賴染色質(zhì)調(diào)控因子SMARCD3蛋白抗體

他克莫司(標準品)NF-H(Neurofilament triplet H)  高分子量神經(jīng)絲蛋白(抗原)SMARCA6/HELLS  淋巴特異性解旋酶抗體

枸櫞酸他莫昔芬NIS(Na+/I-symporter;NIS)  鈉碘轉(zhuǎn)運體蛋白（多肽抗原）SMARCA4/SNF2 beta/BRG1  抑癌基因SNF2β抗體

枸櫞酸他莫昔芬（標準品）NFKBp65(p65 NF-kappa B;p65NFKB)  細胞核因子或稱k基因結(jié)合核因子(多肽抗原)SMARCA2/BRM  ATP依賴解旋酶SMARCA2抗體

坦度替尼;MLN518NR2A (Glutamate receptor2A)  谷氨酸受體（N端抗原）SMARCA1/SNF2L  解旋酶SNF2L抗體

坦度替尼（標準品）NRP-1(neuropilin-1)  神經(jīng)纖毛蛋白-1(抗原)SMAGP  小細胞跨膜糖化蛋白抗體

拉寧NRP-2(neuropilin-2)  神經(jīng)纖毛蛋白-2（抗原）SMAD9  SMAD家族9抗體

替尼泊甙，替尼泊苷NSBP1(Nucleosome-binding protein 1)  核小體結(jié)合蛋白1(抗原)Smad7/Smad6  Smad 7抗體

替尼泊甙，替尼泊苷（標準品）NTP，Neurual thread protein  神經(jīng)絲蛋白（抗原）SMAD5  細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD5抗體

富馬酸替諾福韋酯;泰諾福韋酯OAT-1 (Organic anion transporter 1)human  陰離子轉(zhuǎn)運蛋白-1(人源）Smad4  Smad4抗體
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