?
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
Ginseside Rh2甲酸 95%己內(nèi)酰胺 99%

Naringin甲酸 99%鄰二氯苯 Standard for GC，>99.9%(GC)

(-)-Nicotine氯化氫-乙溶液 化氫含量: 30-40%鄰二氯苯 for HPLC,99%

Sodium Danshensu氯化氫-甲溶液 化氫含量: 20-35%鄰二氯苯  98%

Puerarin二氯異脲酸鈉 96%鄰二氯苯 光譜純,99%

Saikosaponin A三氯異脲酸 97%鄰二氯苯標準溶液 1000μg/ml，溶劑：甲

Saikosaponin B1 Standard for GC，>99.7%鄰二氯苯標準溶液 0.099mg/ml，基體：異辛烷

Saikosaponin C氯 CP,98%鄰二氯苯 CP，97%

Saikosaponin D AR,99%鄰二氯苯 99%

Baicalin  >99.5%甲中1,2－二氯苯標樣 濃度范圍:1034±18ug/ml，分析標準品

Baicalein 99.5%, low iron鄰二氯苯 分析標準品

Scutellarin三氯硅烷 99%苯酚 Standard for GC,≥99.5%

Wogoside乙 AR,99.0%苯酚 AR

Alkaline transfer solution己二酸 超純級，≥99.5% (HPLC)苯酚 CP

1-Ami-2-naphthol-4-sulfonic acid苯胺  ACS, ≥99.0%苯酚 ACS

Ammonium bitartrate酮 AR,99.5% ()苯酚 分析標準品,≥99.6%

TAN[=1-(2-噻唑偶氮)-2-萘酚](>99.0%(T))Cleaved tch1 (Val1744) (D3B8) Rabbit mAbIHH  HHG2抗體

二甲苯偶氮紫II(>95.0%(HPLC))AMPKβ2 AntibodyIGSF9  疫球蛋白超家族成員9抗體

二甲苯偶氮紫IAMPKβ2 AntibodyIGSF8/CD316  免疫球蛋超家族成員8抗體

二甲基偶氮磺IIIAMPKβ1/2 (57C12) Rabbit mAbIGSF6  免疫球蛋白超家族成員6抗體

H-間苯二酚(>97.0%(HPLC))AMPKβ1/2 (57C12) Rabbit mAbIGSF5  免疫球蛋白超家族成員5抗體

偶氮磺III(>90.0%(HPLC))ADAM9 (D64B5) Rabbit mAbIGSF3  免疫球蛋白超家族成員3抗體

2-(4-磺基苯偶氮）-1,8-二羥基萘-3,6-二磺酸三鈉鹽合物(>95.0%(HPLC))ADAM9 (D64B5) Rabbit mAbIGSF21  免疫球蛋白超家族成員21抗體

2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-二甲氨基苯酚(>93.0%(HPLC))EGR1 (15F7) Rabbit mAbIGSF2/CD101  CD101抗體

4-(3,5-二溴-2-吡啶偶氮)-1,3-苯二胺(>98.0%(T))EGR1 (44D5) Rabbit mAbIGSF16/CD300C  免疫球蛋白超家族成員16抗體

5-二基-2-(2-吡啶偶氮)苯酚(>98.0%(HPLC))EPAC1 (5D3) Mouse mAbIGSF12/CD300  免疫球蛋白超家族成員12抗體
副雞嗜血桿菌PCR檢測試劑盒廠家膜粘連蛋白 I抗體Eriodictyol 7,3′-dimethyl ether中文名：圣草酚-7,3'-二甲醚別名：7,3'-二-O-甲基圣草酚分子式：C17H16O6

膜粘連蛋白 Ⅱ抗體3'-O-Methyltaxifolin中文名：3'-O-甲基花旗松素別名：Dihydroisorhamnetin分子式：C16H14O7

活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體Aromadendrin 7-O-rhamside中文名：二氫酚-7-O-鼠李糖苷別名：Dihydrokaempferol 7-O-rhamside; 香橙素-7-O-鼠李糖苷分子式：C21H22O10

通道蛋白4抗體6,4'-Dihydroxy-7-methoxyflavan中文名：別名：分子式：C16H16O4

活化復制因子2抗體Rhamnazin中文名：鼠李秦素別名：7,3'-Di-O-methylquercetin; Quercetin 7,3'-dimethyl ether分子式：C17H14O7